一、采血環(huán)節(jié)溶血誘因
 

　　采血操作粗暴
 

　　快速猛抽血液、針頭過(guò)小、反復(fù)穿刺血管，紅細(xì)胞受機(jī)械擠壓破裂，直接引發(fā)溶血；小鼠眼眶采血深度過(guò)深、切割力度過(guò)大極易出現(xiàn)該問(wèn)題。
 

　　抗凝 / 促凝器具匹配錯(cuò)誤
 

　　誤用肝素、EDTA 抗凝管收集血清樣本，或促凝管未提前潤(rùn)洗，血細(xì)胞滲透壓失衡破損；采血管管壁干燥，血液快速粘附干裂紅細(xì)胞。
 

　　血液流速異常
 

　　采血時(shí)血液沿管壁高速直沖管底，沖擊產(chǎn)生剪切力破壞細(xì)胞膜，是實(shí)驗(yàn)室最常見(jiàn)溶血誘因。
 

　　二、靜置分離溶血誘因
 

　　室溫靜置時(shí)間不當(dāng)
 

　　血液室溫放置超過(guò) 4 小時(shí)，紅細(xì)胞自溶；環(huán)境溫度高于 30℃會(huì)加速細(xì)胞代謝破裂。
 

　　未凝固提前離心
 

　　血液未完全析出血凝塊就上機(jī)離心，未凝固紅細(xì)胞受離心力破碎，出現(xiàn)大面積溶血。
 

　　凝血過(guò)程劇烈晃動(dòng)
 

　　采血后顛倒搖晃、震蕩采血管，血細(xì)胞互相摩擦破損，肉眼可見(jiàn)血清發(fā)紅。
 

　　三、離心與分裝溶血誘因
 

　　離心參數(shù)超標(biāo)
 

　　轉(zhuǎn)速過(guò)高、離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，強(qiáng)大離心力撕裂紅細(xì)胞膜；離心后劇烈傾倒血清，血凝塊擠壓混入紅細(xì)胞。
 

　　凍融操作失誤
 

　　新鮮血清未分裝直接 - 20℃長(zhǎng)期凍存，反復(fù)凍融會(huì)造成紅細(xì)胞碎片釋放血紅蛋白；未室溫解凍直接 37℃快速融解，溫差沖擊溶血。
 

　　分裝針頭過(guò)細(xì)
 

　　吸取血清使用細(xì)針頭抽吸，液體剪切力導(dǎo)致殘留紅細(xì)胞破裂。
 

　　四、樣本儲(chǔ)存溶血誘因
 

　　血清長(zhǎng)時(shí)間敞口放置
 

　　樣本接觸空氣發(fā)生氧化，少量殘留紅細(xì)胞逐步自溶，干擾生化、激素、ELISA 檢測(cè)結(jié)果。
 

　　儲(chǔ)存溫度波動(dòng)
 

　　冰箱頻繁啟停、樣本反復(fù)拿出檢測(cè)，溫度忽高忽低加劇溶血。
 

　　五、全套標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)避方案
 

　　1. 采血規(guī)范
 

　　選用適配采血針頭，采血時(shí)血液緩慢沿采血管管壁流入，禁止直沖底部；眼眶采血?jiǎng)幼鬏p柔，一次穿刺成功，避免反復(fù)扎取；血清樣本僅使用無(wú)抗凝促凝采血管。采血后輕柔顛倒 2-3 次混勻，嚴(yán)禁劇烈震蕩。
 

　　2. 靜置凝固規(guī)范
 

　　室溫 20~25℃靜置 30~60min，待完整血凝塊形成再離心；高溫環(huán)境縮短靜置時(shí)長(zhǎng)，放置陰涼避光處。
 

　　3. 離心參數(shù)控制
 

　　小鼠血液離心標(biāo)準(zhǔn)：3000r/min，10min；離心結(jié)束平穩(wěn)取出，傾斜管壁緩慢吸取上層血清，不觸碰底層血凝塊。吸取血清選用粗口移液管，減少剪切損傷。
 

　　4. 凍存與解凍管控
 

　　分離完成立即分裝至避光凍存管，單次分裝小體積，避免反復(fù)凍融；短期 4℃存放不超過(guò) 24h，長(zhǎng)期 - 80℃保存；解凍置于室溫自然融化，禁止水浴快速升溫。
 

　　5. 樣本質(zhì)控篩選
 

　　肉眼觀察血清清澈淡黃為合格；淡紅、深紅、渾濁樣本判定溶血，直接廢棄，不可用于指標(biāo)檢測(cè)，防止數(shù)據(jù)虛高、假陽(yáng)性。
 

　　六、溶血樣本危害總結(jié)
 

　　溶血釋放血紅蛋白、胞內(nèi)酶類(lèi)，會(huì)干擾血糖、血脂、炎癥因子、激素等檢測(cè)數(shù)值，大幅降低實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。嚴(yán)格落實(shí)采血、凝固、離心、凍存全流程操作規(guī)范，可從源頭杜絕小鼠血清溶血問(wèn)題。